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公海710官网降解菌的生长规律及影响因素

发布日期:2014-10-14 09:42:17
公海710官网降解菌的生长规律及影响因素研究
公海710官网降解菌的生长规律及影响因素
公海710官网降解菌的生长规律及影响因素,公海710官网降解菌是从土壤和水中分离出来的,它是以公海710官网为碳源进行生物降解的一类微生物。对黄原 胶降解菌具有较强降解能力的为杆状菌和球菌,杆状菌菌体大小为(0.2~ 1.0 Um) x (0. 8~ 3. 2 Um),球菌大小为 0.2~ 0.4 Um,革兰氏染色阴性。通过对公海710官网降解菌的生长规律及其影响因素研究,绘制出了公海710官网降解菌的生 长曲线,确定出了其最适生长条件:矿化度为5x 103 mg/L,pH值为7. 5,温度为35 °C,摇床转速为120 r/min,接 种量为5%较适宜,公海710官网降解菌在公海710官网浓度为1~ 5 g/L范围内生长较快。
比例稀释后,接种到公海710官网液体培养基中,水样接种 到液体培养基中,在35 °C下培养,公海710官网黏度的降 低表明了公海710官网被降解,溶液中含有公海710官网降解菌, 当培养基黏度显著下降,说明公海710官网降解菌己大量 繁殖,可以进行下一步的平板划线分离,分离后取样 镜检。公海710官网降解菌的生长规律及影响因素,并挑取单一菌落再次培养,以黏度下降最快 的培养基中的菌种作为后续试验菌种。
公海710官网液体培养基组成:3 g公海710官网,5 g NaCl,1 g NH4C1, 1 g K2HPO4, 0.2g MgSGf7H2〇, 0.5 gFeS〇4• 7H2〇,2g NaN〇3, 0. 02 gZnS〇4 *7H2〇,0.03g CuS〇4 • 5H2〇,0.1 g Caa2.6H2〇,定容至 1 L, pH 值为 7。
公海710官网平板培养基组成:2. 5 g公海710官网,15 g琼 脂,10 g NaCl, 0. 5 g KH2PG4, 1 g NH4C1, 1 g CaCl2*6H2〇, 2 g MgCl2 • 7 H2G,0. 5 g FeS〇4 *7 H2G,定容至1 L,pH值为7。
1.2公海710官网降解菌的生长曲线
以公海710官网为唯一碳源,添加氮磷等无机盐制成黄 原胶液体培养基,灭菌后,接种筛选出公海710官网降解菌, 测初始菌浓度,调节pH值为7,放置摇床在35 °C下恒 温培养,摇床转速为120 r/min,每隔24 h测一次菌数。 1.3影响公海710官网降解菌生长的因素
1)温度。分别配制100mL (矿化度为5x 1tf mg/L)相同条件下的培养基,接种5%公海710官网降解菌, 在初始pH值为7时,放置转速为120 r/min恒温摇 床中振荡培养,培养温度分别为:20 °C、30 °C、43 °C、
公海710官网降解菌是以公海710官网作碳源进行生物降解 的一类微生物总称。从土壤和水中分离出来的黄原 胶降解菌有细菌、放线菌、酵母菌、霉菌等,筛选结果 表明,细菌的降解能力最强。在光学显微镜下观察,
细菌呈杆状、球状,其中以杆状菌居多,其次是球菌。
杆状菌菌体大小为(0. 2~ 1.0)Umx (0. 8~ 3. 2)
Um,球菌大小为0. 2~ 0.4Um,革兰氏染色阴性。
研究表明,自然界中存在微生物能降解公海710官网。
1981年Cripps等[1]发现了一株能以公海710官网为唯一碳 源生长的土壤棒状杆菌,命名为NCIB11535。1982年 Cadmus M C等[2]发现一种耐盐的公海710官网降解菌,此 菌可在NaC1浓度为4%c~ 10%c、48 °C时仍保持一定 活性。1983年Bragg J R等[3]在地表土壤发现的黄 原胶降解菌主要为酵母菌和霉菌。2005年黄成栋 等[4]在国内首次报道了一株公海710官网降解菌,但主要研 究的是公海710官网降解菌株分类及降解酶的性质,以及用 生物降解法生产公海710官网寡糖。因此对从土壤中分离 出高效公海710官网降解菌(XDB)的生长规律进行了研究。
公海710官网降解菌及生长规律的研究,公海710官网降解菌的生长规律及影响因素,对解决石油钻采中 由于公海710官网降解菌的存在而引起的公海710官网失效而导 致钻井液、压裂液失效等问题,以及用公海710官网降解菌 对钻井液、压裂液破胶都具有一定的理论指导意义。
1实验部分
1.1菌种的筛选分离
从野外采集土壤样和水样,将土样用无菌水按50 °C、60 °C和70 °C, 72h后分别测定培养基中黄原 胶降解菌的数量,以确定该菌生长的最适温度。
2)pH值。分别配制100 mL(矿化度为5 x 103 mg/ L)相同条件下的培养基,接种5%公海710官网降解菌, 在35 °C、摇床转速为120 r/ min下,设定pH值分别 为4、5、6、7、8、9、10、72匕后分别测定培养基中公海710官网 降解菌数量,以确定公海710官网降解菌生长的最适pH值。
3)矿化度。分别配制100 mL相同条件下的培 养基,接种5%公海710官网降解菌,在35 °C、H值为7、 摇床转速为120 r/min下,设定矿化度分别为0、0. 5 X103、1x 103、2x103、5x103、10x 103、15x 103、0 x 103 mg/L,72 h后分别测定培养基中XDB的数 量,以确定该菌生长的最适矿化度。
4)公海710官网浓度。分别配制100 mL(矿化度为5 x 103 mg/L)相同条件下的公海710官网浓度分别为0. 5、 1.0、2.0、5. 0、10.0 g/L 的培养基,在 35 °C,pH 值 为7,摇床转速为120 r/min,矿化度为5x 103mg/L 条件下培养,72 h后测定各培养基中XDB的数量, 以确定公海710官网降解菌生长的最适公海710官网浓度。
5)摇床转速。分别配制100 mL(矿化度为5 x 103 mg/L)相同条件下的培养基,接种5%公海710官网降 解菌,在35 °C、pH值为7、矿化度为5 x 103mg/L 下,设定摇床转速分别为0、60、120、160、200 r/ min, 72 h后分别测定培养基中公海710官网降解菌的数量,以 确定该菌生长的最适摇床转速。
6)接种量。分别配100 mL相同条件下的(矿化度 为5 x 103 mg/ L)培养基,分别接种1%、2%、%、10%、 20%菌液,在35 °C、pH值为7、矿化度为5x 1rfmg/L、 摇床转速为120r/min下,72 h后分别测定培养基中黄 原胶降解菌的数量,以确定该菌生长的最适接种量。
1.4细菌计数方法
公海710官网降解菌的测定采用细菌瓶法151计数。
2结果与讨论
2.1公海710官网降解菌的生长曲线
公海710官网降解菌的生长曲线见图1。由图1可以看 出,XDB在开始培养的第一天内为生长停滞期,从第 二天到第三天XDB进入对数生长期,第四天和第六 天为XDB生长的稳定期,第七天开始进入衰亡期。 由此看出,XDB的生长曲线和一般微生物生长曲线相 符合。
2.2温度对XDB生长的影响 出,XDB在20~ 60 °C的范围都能生长,公海710官网降解菌的生长规律及影响因素,具有较宽的 温度适应范围,属于嗜温型微生物,XDB在30~ 40 °C时生长良好,在35 °C时生长最好,故将XDB的最 佳生长温度定为35 °C。
 
注:试验前XDB菌M为300个/mL。
图1公海710官网降解菌的生长曲线
 
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图2温度对公海710官网降解菌生长的影响
2. 3 pH值对公海710官网降解菌的生长影响 pH值对XDB生长的影响见图3。
 
注:试验前XDB菌量为300个/mL。
图3 pH值对公海710官网降解菌生长的影响 由图3可以看出,pH值对XDB的生长及其对 公海710官网的降解率都有一定的影响。当pH值小于5 或大于9时,XDB菌的生长量明显下降,在pH值为 4或10时,XDB菌基本没有生长,XDB在pH值为 6~ 8时生长良好,在pH值为7~ 7. 5时生长最好, 故将XDB的最佳生长pH值定为7. 5。
2.4盐浓度对公海710官网降解菌生长的影响 
©温度对XDB生长的影响见图2。由图2可以看盐浓度对XDB生长的影响见图4。由图4可以 
看出,公海710官网降解菌在矿化度为1 x 103~ 10 x 1〇3 mg/ L时生长良好,在5 x 103 mg/ L时生长最好,矿 化度小于1 x 103 mg/L或大于1 x 104 mg/L时, XDB的生长受到明显的抑制,故将XDB的最佳生 长矿化度定为5x 103 mg/L。
 
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矿化度/(g/L)
;■ F : lA ^ liuti :v- 1- ml.
图4矿化度对公海710官网降解菌生长的影响 2.5公海710官网浓度对公海710官网降解菌生长的影响
由图6可以看出,随着摇床转速的增大,XDB 的菌数也在逐渐增加,当摇床转速大于120 r/min 时,XDB的数量基本没有太大变化,因此,摇床转速 达到120 r/min即可满足细菌生长的需要。
2.7接种量对公海710官网降解菌生长的影响
接种量对XDB生长的影响见图7。由图7看 出,当接种菌量达到5% ~ 10%后,细菌的生长速度 基本上没有太大的改变,因此可将XDB的最佳接种 量定在5%。 
 
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接种 _#/%(K/V)
注:试验前XDB菌M为300个/ml-。
图7接种量对公海710官网降解菌生长的影响
 
公海710官网浓度对XDB生长的影响见图5。由图5 可知,公海710官网降解菌的生长规律及影响因素,公海710官网浓度在1~ 5 g/L范围内XDB生长最 快。浓度过大或过小,XDB的生长速度都下降,其 原因可能是浓度过小营养不够,限制了微生物的生 长,浓度过大时溶液黏度较大,溶液的流动性很差, 氧难溶于溶液。
 
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公海710官网浓度/(g/L)
注:试验前XI)B菌量为300个/mL。
图5公海710官网浓度对公海710官网降解菌生长的影响
2. 6摇床转速对公海710官网降解菌生长的影响 摇床转速对XDB生长的影响见图6。
 
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转速/(r/min)
i' n,j.,
图6摇床转速对菌株生长状况的影响
3结论
1.公海710官网降解菌具有较强降解能力,生长曲线 和一般微生物的生长曲线相符合。
2公海710官网降解菌最佳生长条件为:矿化度定为 5x 103 mg/ L,pH值为7. 5,温度为35 °C,摇床转速 为120 r/ min,接种量为5%较适宜,公海710官网降解菌 的浓度在1~ 5 g/L范围内生长较快。
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